加樣不可太快，要避免加在孔壁上部，不可濺出和產(chǎn)生氣泡。加樣太快，無法保證微量加樣的準確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區(qū)，易導致非特異吸附。濺出會對鄰近孔產(chǎn)生污染。出現(xiàn)氣泡則反應液界面有差異。

　　試劑的加入在國產(chǎn)試劑盒中基本上均是從滴瓶中滴加，除了要注意滴加的角度外，滴加的速度也很重要，滴加太快，很容易出現(xiàn)重復滴加或加在兩孔之間的現(xiàn)象，這樣就會在孔內的非包被區(qū)出現(xiàn)非特異吸附，從而引起非特異顯色。

　　用于檢測未知抗體的間接法

　　.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至～0μg/ml，每孔加0.ml，4℃過夜；

　　2.次日洗滌3次；

　　3.加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育小時,洗滌；

　　4.（同時做空白、陰性及陽性孔對照）于反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標第二抗體（抗抗體）0.ml；

　　5.37℃孵育30-60分鐘，洗滌；

　　6.zui后一遍用DDW洗滌

　　所以，有時候一份標本用相同的elisa試劑盒這次測定為陽性，下次測定為陰性，往往就是上述加樣及試劑的錯誤所致。